Секрет долголетия ночницы.

Биологи уже давно считают, что продолжительность жизни животного определяется очень просто: чем оно больше, тем дольше живет.

Получение биспиренилного производного олигонуклеотида

Материалы по биологии и химии / Подавление экспрессии гена EGFP в клетках с использованием конъюгатов олигонуклеотида с пиреном / Получение биспиренилного производного олигонуклеотида

Конъюгаты получали согласно модифицированной методике [30]

Активация.

Реакционная смесь содержала 1 - 4 о.е. (5 - 20 нмоль) цитавлоновой соли олигодезоксирибонуклеотда и по 10 мг высушенных DMAP, PPh3 и (PyS)2. Активацию 5’-концевого фосфата проводили следующим образом: сначала 4 раза повторяли термостатирование при 50 ºС в течение 1 - 1,5 мин и последующее интенсивное перемешивание в течение 5 - 10 с, затем инкубировали при 37 ºС в течение 15 мин.

Конъюгация.

К раствору олигонуклеотида с активированным 5’-концевым фосфатом добавляли пиренилметиламин (2 мг), высушенный в эксикаторе над P2O5 под вакуумом. Реакционная смесь непрерывно перемешивали в течение 2 часов при 56 ºС.

Выделение продукта.

Продукты осаждали из раствора 1,2 мл диэтилового эфира, растворяли в 50 мкл 3 М водного раствора перхлората лития, переосаждали 1,2 мл смеси диэтилового эфира и 2% раствора перхлората лития в ацетоне (1:1) и растворяли в 50 мкл воды. Смесь продуктов реакции разделяли с помощью обращено-фазовой хроматографии в градиенте ацетонитрила (см. 2.4). Фракции анализировали методом задержки в геле с помощью электрофореза в ПААГ в денатурирующих условиях.