Меню сайта

Последние новости

Причина отравления вод океана.

Американские ученые из штата Мичиган полагают, что в качестве главной причины отравления вод Мирового океана ртутью являются бактерии.

Секрет выживания лягушек.

Американским ученым удалось выяснить, как лягушкам удается продолжать жить даже после глубокой заморозки.

Секрет долголетия ночницы.

Биологи уже давно считают, что продолжительность жизни животного определяется очень просто: чем оно больше, тем дольше живет.




Присоединение объёмных заместителей
Материалы по биологии и химии / Подавление экспрессии гена EGFP в клетках с использованием конъюгатов олигонуклеотида с пиреном / Присоединение объёмных заместителей
Страница 1

Способность проникать внутрь клетки, минуя клеточную мембрану, - одно из качеств, которое должно присутствовать у эффективного антисмыслового олигонуклеотида. Большинство описанных выше модификаций нуклеотидов в составе ODN не оказывают значительного влияния на транспорт ODN через клеточную мембрану. Существует несколько путей проникновения молекул через плазмалемму, но для ODN важны два: диффузный, или не рецептор-опосредованный, и рецептор-опосредованный. Транспорт по первому варианту затрудняется суммарным отрицательным зарядом ODN и их гидрофильностью. Использование второго пути ограничено недостаточными данными о поверхностных белках мембраны клеток, отвечающих за транспорт нуклеиновых кислот в клетку. Создание конъюгатов ODN с различными химическими группами способствует повышению эффективности транспорта по тому или иному пути в зависимости от типа химической группы и места её присоединения к ODN. На рисунке 9 представлены варианты линкеров, которые используются при получении конъюгатов. Лиганды можно присоединять к азотистым основаниям, концевым фосфатам, фосфодиэфирным (или аналогичным им) связям, а также остаткам сахара. Некоторые типы химических групп позволяют также визуализировать компартментализацию путём детекции флуоресценции. модификация олигонуклеотид антисмысловый реакция

Рис.9. Примеры линкеров для присоединения лигандов.

Частичная и даже полная нейтрализация отрицательного заряда ODN не оказывает существенного эффекта на способность ODN к самопроизвольному транспорту в клетку. Присоединение различных объёмных гидрофобных лигандов, в частности, тех, что изображены на рисунке 9, облегчает транспорт ODN через мембрану.

Рис.10. Примеры липофильных лигандов.

Хорошо изучены конъюгаты с холестеролом [3,4,24,25]. Механизм, улучшающий проникновение в клетку за счёт присоединения холестерола, ещё не до конца ясен, хотя, предполагается рецептор-опосредованное включение липопротеидов [25]. Холестероловые конъюгаты образуют мицеллы, что облегчает их транспорт внутрь клетки. Присоединяют остаток холестерола обычно по концевым 5’- и 3’-фосфатам, причём 3’-монохолестерилолигонуклеотиды более эффективны по сравнению с 5’-монохолестерилолигонуклеотиды, а самыми действенными являются 5’,3’-бисхолестерилолигонуклеотиды. К примеру, через 6 мин после инъекции в кровь мыши уровень в тканях 3’-мономодифицированных фосфоротиоатиов был в 4 раза, а 5’-моно- и 3’,5’-бисмодифицированных - в 7 раз выше по сравнению с немодифицированными фосфоротиоатами [27].

Используют мономеры с 5’- или/и 3’-холестерилзамещённым фосфатом [2,24], олигонуклеотиды с лигандом, конъюгированным с фосфодиэфирной связью перед 3’-концевым нуклеозидом [25], а также холестериловые дендримеры с остатком лизина в качестве линкера (см. рис. 11) [23].

Рис.11. Неразветвлённые и разветвлённые конъюгаты с холестеролом.

Олигонуклеотиды, конъюгированные с другими гидрофобными молекулами (адамантан, пирен, эйкозановая кислота и др.), были синтезированы и сравнены с холестероловыми. Холестероловые конъюгаты показали оптимальную липофильность, а также хорошую способность к аккумуляции в печени [24].

Страницы: 1 2

Смотрите также

Биология и экология птиц Демского района
Введение Состояние орнитофауны является одной из важнейших экологических характеристик района. Она позволяет оценить степень хозяйственной освоенности, антропогенного давления на прир ...

Пространство в классической механике. Закон распространения теплоты Фурье
...

Демографическая теория Капицы
Введение Сергей Петрович Капица (14 февраля 1928, Кембридж - 14 августа 2012, Москва) - советский и российский учёный-физик, телеведущий, главный редактор журнала "В мире науки&q ...