Меню сайта

Последние новости

Причина отравления вод океана.

Американские ученые из штата Мичиган полагают, что в качестве главной причины отравления вод Мирового океана ртутью являются бактерии.

Секрет выживания лягушек.

Американским ученым удалось выяснить, как лягушкам удается продолжать жить даже после глубокой заморозки.

Секрет долголетия ночницы.

Биологи уже давно считают, что продолжительность жизни животного определяется очень просто: чем оно больше, тем дольше живет.




Методы выявления генов устойчивости пшеницы
Материалы по биологии и химии / Молекулярно-генетические методы для выявления генов устойчивости пшеницы / Методы выявления генов устойчивости пшеницы
Страница 2

Сателлитная ДНК

Микросателлиты - (или простые короткие (тандемные) повторы) - варьирующие участки (локусы) в ядерной ДНК и ДНК органелл (митохондрий и пластид), состоящие из повторяющихся фрагментов длиной от 1 до 6 пар оснований. Используются как молекулярные маркеры в определении родства, принадлежности к конкретной популяции, для исследования гибридизации. Микросателлиты характеризуются высокой скоростью изменения последовательностей, обусловленной «проскальзыванием» при репликации ДНК и точечными мутациями. Представляют собой одну из разновидностей сателлитной ДНК. Микросателлитные последовательности небольшой длины, называемые короткими тандемными повторами (2-6 нуклеотидов, от. англ. STR - short tandem repeats), используются при картировании геномов в работе с редкими видами.

Минисателлиты - поворяющиеся фрагменты ДНК длиной от 7 и более нуклеотидов. Являются одной из разновидностей сателлитной ДНК. Они встречаются более чем в 1000 местах генома человека. Используются в качестве ДНК-маркеров. Механизмами происхождения являются "проскальзывания" при репликации ДНК, точечные мутации и рекомбинация. Минисателлиты состоят из повторяющихся цепочек, преимущественно из вариантов гуанин-цитозин, длиной от 10 до 100 пар оснований.

Теоретически ПЦР открывает широкие возможности для идентификации тех или иных генов и видов. Все довольно просто. Ищем в геноме участок в котором находится ген, подбираем к этому участку специфическую и пару праймеров, которая комплементарна только искомому участку и вперед. Проводим ПЦР и точно знаем, есть ли искомый ген или нет. Проблема заключается в том, что для того чтобы найти искомый ген, узнать его последовательность, требуется очень много труда, времени, материалов, оборудования, а стало быть - денег.

Методы, использующие ПЦР, могут иметь различную степень специфичности. Некоторые методики не требуют знания последовательности ДНК, а так как сиквенс (считывание последовательности) интересующего участка довольно дорог и требует хорошего дорогостоящего оборудования, эти методы все еще часто применяются на практике.

К таким методам относится маркирование по полиморфизму длин продуктов амплификации.

• RAPD маркеры - маркеры получающиеся в результате случайной амплификации ДНК (Williams et al, 1990).

• ISSR маркеры - маркеры основанные на межмикросателитных последовательностях (Zietkiewicz et al, 1994).

• AFLP маркеры - маркеры полиморфизма длин амплифицированных фрагментов ДНК (Vos et al., 1995).

AFLP - Amplified Fragment Length Polymorphism

AFLP анализ - сложный метод анализа, состоящий из нескольких этапов. В анализе используется праймер с искусственно добавленной последовательностью.

1. Геномная ДНК рестрицируется двумя рестриктазами (EcoRI и MseI) с образованием фрагментов с выступающими 3’ - концами.

2. Рестрицированная геномная ДНК легируется с адаптером, содержащим «липкие» концы для данных рестрикционных сайтов.

. Далее проводятся две последовательные ПЦР: В первой ПЦР используются праймеры полностью комплементарные адаптерам EcoRI и MseI, в результате чего образуется большое количество продуктов амплификации между адаптерами EcoRI и MseI, которые невозможно дифференцировать с помощью электрофореза. Поэтому во второй ПЦР праймеры с адаптерами EcoRI и MseI содержат на 3’ - конце дополнительные и некомплементарные адаптерам основания (от 1 до 3) для селективной амплификации.

4. Разделение фрагментов ДНК проводят в полиакриламидном геле с радиоктивной или с флуорисцентной меткой.

Получаемый фингенрпринт ДНК обычно высоко полиморфен и как правило хорошо воспроизводим.

Страницы: 1 2 3 4

Смотрите также

Онтогенез черепно-мозговых нервов человека
ВВЕДЕНИЕ Онтогенез - это индивидуальное развитие организма, в ходе которого происходит преобразование его морфофизиологических, физиолого-биохимических и цитогенетических признаков. ...

Демографическая теория Капицы
Введение Сергей Петрович Капица (14 февраля 1928, Кембридж - 14 августа 2012, Москва) - советский и российский учёный-физик, телеведущий, главный редактор журнала "В мире науки&q ...

Некоторые растения, внесенные в Красную книгу РСО-Алания
Введение красный книга растение защита Проблема охраны растительного мира вплотную встала перед человечеством в конце 60-х годов прошлого века. В международном масштабе и в рамках отде ...