Секрет долголетия ночницы.

Биологи уже давно считают, что продолжительность жизни животного определяется очень просто: чем оно больше, тем дольше живет.

Материалы и методы. Материалы

Материалы по биологии и химии / Экспериментальное исследование активации системы свертывания ферментами фибринолиза / Материалы и методы. Материалы

Урокиназа. В экспериментах использовалась высокомолекулярная урокиназа (HMW-uPA, American Diagnostica, Stamford, CT), M=52 кДа. Белок находился в буфере 50 mM TRIS-HCl, 100 mM NaCl, 0.1% PEG, 200 mM Mannitol, pH 7.4.

Тканевый активатор плазминогена. Использовался медицинский препарат «Actilyse» (Boehringer Ingelheim, Германия). 1 флакон содержит алтеплаза 50 мг (1 мл готового р-ра - алтеплаза 1 мг); вспомогательные вещества: L-аргинин (1.742 г/фл.), фосфорная кислота (536 мг/фл.), полисорбат 80 (менее 5 мг/фл., менее 100 мкг/1 мл готового раствора).

Стрептокиназа. В экспериментах использовался очищенный белок Streptokinase from hemolytic Streptococcus (PN S3134), активность >4200МЕ/мг (Sigma, Saint Louis, MO).

Подготовка плазмы. Человеческая кровь здоровых доноров была предоставлена Гематологическим научным центром РАМН. Использовался пул плазмы 4 здоровых доноров. В кровь был добавлен 3.8% цитрат натрия (pH 5.5) в объемном отношении кровь/антикоагулянт 9:1, а также добавлен трипсиновый ингибитор контактной активации в конечной концентрации 0.4 г/литр для ингибирования контактного пути активации свертывания. После предварительного отделения эритроцитов центрифугированием в течение 15 минут при 1600g, плазму центрифугируют 5 минут при 10 000g для удаления тромбоцитов. Полученная таким образом свободная от тромбоцитов плазма содержит 15-70 мкМ ионов свободного кальция, а концентрация тромбоцитов в ней не превышает 109 клеток/литр.

Плазма дефицитная по XI фактору: Замороженная плазма (Affinity biologicals, Ancaster, Ontario).

Плазма дефицитная по IX фактору: Замороженная плазма (Precision biologics, Westlake Village, CA).

Фибриноген: Очищенный белок Fibrinogen from human plasma (Sigma, Sant Louis, Missouri). M=340кД.

Протромбин: Очищенный белок factor II from human plasma (Sigma, Sant Louis, Missouri).