Меню сайта

Последние новости

Причина отравления вод океана.

Американские ученые из штата Мичиган полагают, что в качестве главной причины отравления вод Мирового океана ртутью являются бактерии.

Секрет выживания лягушек.

Американским ученым удалось выяснить, как лягушкам удается продолжать жить даже после глубокой заморозки.

Секрет долголетия ночницы.

Биологи уже давно считают, что продолжительность жизни животного определяется очень просто: чем оно больше, тем дольше живет.




Получение кДНК с помощью реакции обратной транскрипции
Материалы по биологии и химии / Подавление экспрессии гена EGFP в клетках с использованием конъюгатов олигонуклеотида с пиреном / Получение кДНК с помощью реакции обратной транскрипции

Образец РНК подвергали гидролизу ДНКазой I для очистки от остатков ДНК в присутствии 1-кратного буфера для ДНКазы I. Реакционную смесь инкубировали при 37 ºС в течение 1 ч. РНК осаждали из реакционной смеси избытком этанола в присутствии ацетата натрия. Осадок растворяли воде. Измеряли оптическую плотность очищенной РНК.

Готовили водный раствор смеси РНК и «гексапраймера» и инкубировали его в течение 3 мин при 70 ºС, затем 1,5 мин во льду. После этого к смеси добавляли остальные компоненты (буфер для ОТ, dNTP, DTT, ревертаза MuMLV). Концентрации компонентов в РС приведены в табл. 4.

Таблица 4. Состав РС для ОТ.

Компонент

Концентрация или количество в РС

Буфер для ОТ

1 х

dNTP

1 мМ

DTT

5 мМ

«Гексапраймер»

25 мкМ

MuML-V

40 е.а.

РНК

2 мкг

РС инкубировали 10 минут при комнатной температуре, затем 1 час при 42 ºС, затем, для гидролиза остатков РНК, 10 минут при 70 ºС. Качество полученной кДНК оценивали методом ПЦР с использованием специфических пар праймеров.

Смотрите также

Асептика в биотехнологии
Введение Биотехнологические процессы в основном проводят в асептических условиях. Асептика - это комплекс мероприятий, направленных на предотвращение попадания в среду посторонних вещ ...

Органическая живая природа в концепции современного естествознания
Введение Жизнь на Земле чрезвычайно многообразна. Она представлена ядерными и до ядерными одно- и многоклеточными существами. Богатейший мир многоклеточных существ представлен тремя ц ...

Проблема орудийной деятельности у высших приматов
Введение   С развитием науки, во второй половине XX-го столетия, список видов, к которым приложимо понятие орудийной деятельности, был существенно расширен. Появилось множество во ...