Секрет долголетия ночницы.

Биологи уже давно считают, что продолжительность жизни животного определяется очень просто: чем оно больше, тем дольше живет.

Получение кДНК с помощью реакции обратной транскрипции

Материалы по биологии и химии / Подавление экспрессии гена EGFP в клетках с использованием конъюгатов олигонуклеотида с пиреном / Получение кДНК с помощью реакции обратной транскрипции

Образец РНК подвергали гидролизу ДНКазой I для очистки от остатков ДНК в присутствии 1-кратного буфера для ДНКазы I. Реакционную смесь инкубировали при 37 ºС в течение 1 ч. РНК осаждали из реакционной смеси избытком этанола в присутствии ацетата натрия. Осадок растворяли воде. Измеряли оптическую плотность очищенной РНК.

Готовили водный раствор смеси РНК и «гексапраймера» и инкубировали его в течение 3 мин при 70 ºС, затем 1,5 мин во льду. После этого к смеси добавляли остальные компоненты (буфер для ОТ, dNTP, DTT, ревертаза MuMLV). Концентрации компонентов в РС приведены в табл. 4.

Таблица 4. Состав РС для ОТ.

РС инкубировали 10 минут при комнатной температуре, затем 1 час при 42 ºС, затем, для гидролиза остатков РНК, 10 минут при 70 ºС. Качество полученной кДНК оценивали методом ПЦР с использованием специфических пар праймеров.