Секрет долголетия ночницы.

Биологи уже давно считают, что продолжительность жизни животного определяется очень просто: чем оно больше, тем дольше живет.

Приготовление цитавлоновых солей олигонуклеотидов

Материалы по биологии и химии / Подавление экспрессии гена EGFP в клетках с использованием конъюгатов олигонуклеотида с пиреном / Приготовление цитавлоновых солей олигонуклеотидов

Для получения цитавлоновых солей олигонуклеотида готовили раствор, содержащий 1 - 6,5 о.е. олигодезоксирибонуклеотида в 90 мкл воды. Расчет добавляемого в реакционную смесь 2% водного раствора цитавлона производили с учётом 2,5-кратного избытка цитавлона по отношению к суммарному количеству атомов фосфора в составе 5’-концевого фосфата и фосфодиэфирных связей олигодезоксирибонуклеотида. Раствор цитавлона добавляли порциями, причём после добавления каждой должен выпадать белый осадок, что свидетельствует о протекании реакции.

Добавляли сначала 1/3 рассчитанного объёма раствора цитавлона к раствору олигодезоксинуклеотида, реакционную смесь перемешивали и центрифугировали при комнатной температуре в течение 5 минут с круговой частотой, равной 12500 об/мин.

После этого в реакционную смесь вносили 1/4 рассчитанного объёма раствора цитавлона, повторяли перемешивание и центрифугирование.

Аналогичные действия выполняли и при добавлении 1/6 рассчитанного объёма раствора цитавлона.

После последнего центрифугирования супернатант отбрасывали, а к осадку добавлялои 100 мкл метанола.

Метанол выпаривали на вакуумном испарителе, полученную соль олигонуклеотида высушивали над P2O5 в вакуумированном эксикаторе.