Секрет долголетия ночницы.

Биологи уже давно считают, что продолжительность жизни животного определяется очень просто: чем оно больше, тем дольше живет.

Выделение суммарной РНК методом хлороформ-фенольной экстракции

Материалы по биологии и химии / Подавление экспрессии гена EGFP в клетках с использованием конъюгатов олигонуклеотида с пиреном / Выделение суммарной РНК методом хлороформ-фенольной экстракции

Суспензию клеток центрифугировали при 4 ºС с круговой частотой 1000 об/мин в течение 10 мин. Супернатант отбрасывали, к осадку клеток добавляли 500 мкл буфера PBS, полученную суспензию центрифугировали при 4 ºС с круговой частотой 1000 об/мин в течение 10 мин. К осадку добавляли буфер для лизиса из расчета 200 мкл/106 клеток и инкубировали во льду в течение 13 мин. Затем суспензию центрифугировали при 4 ºС с круговой частотой 13000 об/мин в течение 10 мин, осадок отбрасывали. К полученному раствору добавляли десятую часть его объёма раствора ацетата натрия с pH = 4,2. Дважды проводили фенольную экстракцию и один раз - экстракцию смесью фенола и хлороворма в объёмном отношении 1:1, каждый рас отбрасывая органическую фазу. РНК из смеси осаждали тройным объёмным избытком этанола в присутствии 0,3 М ацетата аммония в течение суток при - 20 ºС. Осаждённую РНК растворяли в 50 мкл воды. Качество выделенной РНК проверяли отношением оптических плотностей на длинах волн 260 и 280 нм и разделением методом электрофореза в агарозном геле.